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目前关于组织蛋白酶（cathepsin）在猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）生活周期中发挥功能的研究较少。为了探究宿主细胞中cathepsin在PRRSV吸附、入侵、脱壳、生物合成、组装以及释放过程中的作用，选取源于MA-104的非洲绿猴胚胎肾上皮细胞Marc145细胞系（对PRRSV易感）；...
生长抑素shRNA的慢病毒包装及对生长抑素的抑制作用
生长抑素 shRNA 慢病毒载体 基因沉默
2011/10/21
采用慢病毒(LV)载体介导siRNA感染宿主细胞,研究其对内源性生长抑素(Somatostatin,SS)的抑制作用。首先将筛选出的psh2与辅助质粒共转染293T细胞包装获得假病毒颗粒LV-sh2,同时,包装产生LV-sh0和LV-GFP作为阴性对照。超速离心,梯度稀释法测定病毒滴度,结果提示所构建的重组病毒滴度约为6×107 ifu／mL。病毒感染BHK-21细胞,通过荧光显微镜观察到了...
靶向山羊痘病毒DNA聚合酶基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选
RNAi 山羊痘病毒 BHK-21 抑制
2012/7/18
本研究针对山羊痘病毒基因组高度保守的DNA聚合酶区段， 选取了5个干扰靶位点。根据RNAi技术原理， 构建了包括对照在内的6个shRNA重组表达质粒， 转染细胞后接种病毒， 通过细胞毒液的TCID50测定和用实时荧光定量PCR检测siRNA重组质粒对羊痘病毒DNA聚合酶基因表达的抑制作用。结果显示， 重组表达质粒组的抑制率在63%以上， 其中以pSI-W2最为明显， 抑制率为93.8%。该研究应用...