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利用CRISPR/Cas9系统定点编辑葡萄白粉病感病基因VviEDR2（Enhanced disease resistance 2），在VviEDR2的DUF1336结构域设计靶位点VviEDR2-T1，构建CRISPR/Cas9敲除载体，通过农杆菌介导法转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织。对PCR阳性植株进行靶位点扩增测序，结果表明，共有8个转基因植株在靶位点处发生不同类型的双等位基因突变，编辑效率...
利用CRISPR/Cas9系统定向改良水稻稻瘟病抗性
水稻 CRISPR/Cas9 Pita Pi21 ERF922 稻瘟病抗性
2019/10/24
【目的】CRISPR/Cas9基因编辑技术是作物遗传改良的有效工具。本研究通过对水稻Pita、Pi21和ERF922稻瘟病相关基因进行定点编辑，以期获得能够稳定遗传的抗稻瘟病水稻材料。【方法】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以Pita、Pi21和ERF922为靶基因，构建共编辑载体pC1300-2×35S::Cas9-gPita-gPi21-gERF922 ，用农杆菌转化长粒粳稻恢复系L1...
[目的] CRISPR/Cas9是细菌和古细菌为免受外来DNA片段侵袭形成的一种适应性免疫系统。CRISPR/Cas9已经被作为一种基因编辑的工具广泛应用到很多动物和植物的基因编辑。磷元素是植物生长过程中必需的营养元素，植物对磷的吸收主要由跨膜磷转运蛋白完成。本研究利用CRISPR/Cas9技术对Oryza Japonica Kitaake水稻中冰叶日中花磷转运蛋白McPht基因的同源体OsPht...
利用CRISPR/Cas9系统定向编辑水稻SD1基因
CRISPR/Cas9 基因编辑 水稻 半矮秆基因
2018/7/6
【目的】半矮秆水稻品种的选育和应用是水稻育种的最重大成果之一。半矮秆品种大多是半矮秆基因SD1(semi-dwarf1)功能缺失突变体，为了获得sd1突变体，本研究对SD1基因进行了定向编辑。【方法】利用CRISPR/Cas9系统，以SD1基因为靶基因，构建基因编辑载体CRISPR-SD1，用农杆菌介导的方法转化水稻恢复系申繁17和申繁24。【结果】在2个转化受体的T0代均获得了纯合的sd1突变体...
CRISPR/Cas9系统编辑水稻Wx基因
水稻 CRISPR/Cas9系统 Wx 基因编辑 直链淀粉含量
2018/3/15
【目的】直链淀粉含量与稻米品质密切相关。Wx基因是控制水稻直链淀粉合成的主效基因，通过对Wx基因定点编辑以获得稳定遗传、直链淀粉含量适宜的突变体。【方法】构建CRISPR/Cas9表达载体pGK03-Wx-gRNA (靶点1和2分别在Wx基因第1和第2外显子)，利用工程菌EHA105遗传转化超级稻楚粳27，潮霉素筛选获得转化株系，对转化株系及其后代进行分子检测、测序、基因表达和遗传稳定性分析以及直...
CRISPR-Cas9系统的发现和应用为快速、定向的植物基因组编辑、突变体创制和开展植物功能基因组研究提供了新的技术工具。在本研究中, 我们利用CRISPR-Cas9系统, 对水稻A类MADS-box转录基因OsMADS15进行定点基因组编辑。结果显示, 该体系在T0代即获得3个不同的9522Osmads15双等位突变株系: 株系9522Osmads15-1等位1在靶点缺失1个碱基A, 等位2在靶...
利用CRISPR/Cas9系统定向改良水稻粒长和穗粒数性状
CRISPR/Cas9 基因编辑 水稻 GS3 Gn1a
2018/2/1
【目的】基因组定点编辑技术已成为分子育种的重要手段。本研究拟对GS3和Gn1a功能缺失突变对目标性状的改良效应进行分析，以期为培育高产水稻提供理论基础。【方法】利用CRISPR/Cas9系统，以控制粒型基因GS3和控制每穗粒数基因Gn1a为编辑对象，构建了共敲除载体pC1300-2×35S::Cas9-gGS3-gGn1a，用农杆菌介导法转化4个优质水稻品种，分析了基因突变的特征和相应农艺性状。【...
以水稻OsbHLH116 基因为编辑对象，根据基因编码区序列（CDS）在第一外显子区域设计长度为19 bp的sgRNA，化学合成sgRNA的寡核苷酸序列，然后与CRISPR/Cas9系统表达载体pBUN411连接，再用农杆菌介导法获得水稻转基因株系，最后利用酶切和测序相结合的方法对OsbHLH116 突变体进行了筛选鉴定和脱靶效应分析。结果表明，所构建的pBUN411gRNA载体成功实现了对基因...
利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究
CRISPR-Cas9系统 基因组编辑 突变率
2016/1/26
为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育，本研究将带有绿色荧光蛋白（GFP）和肌肉生长抑制素基因（Myostatin，MSTN）靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系，利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞，使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况，以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果。结...
CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展
人工核酸内切酶 基因编辑 基因打靶 CRISPR/Cas9 RNA指导的核酸内切酶
2014/12/25
由规律成簇间隔短回文重复序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）以及CRISPR相关蛋白9（CRISPR-associated protein 9，Cas9），即CRISPR/Cas9系统改造的第3代人工核酸内切酶，与锌指核酸内切酶(Zinc finger endonuclease，ZFN)以及类转录激...