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近日，中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫与新发病流行病学创新团队在非洲猪瘟病毒现场便捷检测中取得重要进展，首次采用LAMP结合CRISPR系统研制了一种非洲猪瘟病毒（ASFV）新型检测方法，创新了非洲猪瘟检测方法，实现现场便捷快速检测，相关研究成果发表在国际学术期刊《跨境新发病（Transboundary Emerging Diseases）》。
鸡Apob基因组织表达与CRISPR/Cas9敲除系统的构建
鸡 Apob基因 CRISPR/Cas9 脂质代谢
2021/3/30
旨在探究Apob基因在鸡肝脂质代谢过程中的功能。本研究对鸡Apob蛋白进行理化性质分析；利用RT-qPCR检测Apob基因在4周龄黄羽肉鸡组织中的表达情况，每组设置3个重复，进行3次平行试验。根据鸡Apob蛋白关键结构域，在Apob基因外显子设计3对sgRNA，构建Cas/gRNA载体；将重组质粒转染DF-1细胞后，利用T7核酸内切酶I （T7 endonuclease I，T7EI）酶切法和TA...
簇状规则间隔的短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（Cas）系统是一种针对入侵核酸的可遗传性原核适应性免疫系统。CRISPR/Cas系统可以产生高度特异性的基因双链断裂，并通过非同源末端连接（NHEJ）或者同源重组（HR）进行修复，如今已经成为许多生物方便有效的基因组编辑工具。结核分枝杆菌因其基因操作的复杂性，其基因组研究存在诸多困难，因此，CRISPR/Cas系统的出现对结核分枝...
CRISPR/Cas9介导RB1基因敲除及其在鸡前脂肪细胞分化、增殖中的功能研究
CRISPR/Cas9 RB1 鸡 脂肪沉积 分化 增殖
2016/10/31
旨在研究RB1基因在鸡前脂肪细胞分化和增殖过程中的功能，本研究利用CRISPR/Cas9系统在鸡前脂肪细胞中敲除RB1基因，检测鸡前脂肪细胞的分化和增殖能力及相关标志基因的表达水平。结果表明，CRISPR/Cas9系统能够有效介导RB1基因的敲除并引起RB1基因翻译的提前终止，敲除效率可以达到10%。油红O提取比色和CCK-8的结果显示，敲除RB1基因后，鸡前脂肪细胞的分化能力减弱、增殖能力增强；...
CRISPR/Cas9技术的应用性研究
CRISPR/Cas9 遗传操作 基因敲除 基因反转 基因重复
2016/7/26
旨在探索CRISPR/Cas9技术的新应用，本研究通过在小鼠遗传操作（Genetic manipulation）中使用该技术，创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和PCR分析等手段，结果发现，针对DCX基因进行编辑，再现了DCX下调导致神经元迁移障碍的表型，说明该技术能够用于小鼠遗传操作中下调基因表达；其次，该技术还成功应用于Pcdhα基因簇的编辑并研究了基因簇恒定区的...
CRISPR/Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated (Cas)系统是由一种短小RNA调控的对DNA修饰的基因编辑工具，是一种较锌指核酸酶（Zinc-fingers nuclease，ZFN）和转录激活因子样效应物核酸酶（Transcription activat...
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统，并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体；随后人工设计同源修复供体基因序列，并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中，构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系；将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中，PCR鉴定筛选到...
CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除
CRISPR/Cas 基因敲除 鸡
2016/6/22
本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系，实现目的基因定点敲除，为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP (chr2，Expression In PGC) 基因全长，并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3，并构建cas9/gRNA载体；将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1，利用Lucifera...
利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究
CRISPR-Cas9系统 基因组编辑 突变率
2016/1/26
为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育，本研究将带有绿色荧光蛋白（GFP）和肌肉生长抑制素基因（Myostatin，MSTN）靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系，利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞，使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况，以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果。结...
CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展
人工核酸内切酶 基因编辑 基因打靶 CRISPR/Cas9 RNA指导的核酸内切酶
2014/12/25
由规律成簇间隔短回文重复序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）以及CRISPR相关蛋白9（CRISPR-associated protein 9，Cas9），即CRISPR/Cas9系统改造的第3代人工核酸内切酶，与锌指核酸内切酶(Zinc finger endonuclease，ZFN)以及类转录激...