搜索结果: 1-15 共查到“农学 转染”相关记录25条 . 查询时间(0.125 秒)
旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体，而后将其导入成纤维细胞，分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊，采集组织样品，提取RNA后反转录成cDNA，通过PCR反应后利用SoSo试剂盒将纯化的目的片段与表达载体pcDNA3.1连接。酶切鉴定正确后，转至大肠杆菌DH5α感受态细胞，振荡培养并挑取单菌落扩大培养。提取质粒后将p...
旨在利用同源重组构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMP6基因表达载体及共转染成纤维细胞后通过基因表达量变化研究两基因之间的相互作用关系。以敖汉细毛羊为研究对象，采集30日龄的胎羊。首先，通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中Hoxa5、BMP6基因序列和pcDNA3.1序列分别设计1对含有同源臂的引物，通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMP6基因片段、利用SoSo试剂盒将目的片段连接到p...
旨在构建干扰胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor-II，IGF-II）的重组质粒载体，研究IGF-II对牦牛睾丸支持细胞的影响。本研究设计并合成针对牦牛IGF-II的shRNA寡核苷酸，并将其克隆至pLKO.1质粒载体上，转染牦牛睾丸支持细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定的细胞株，并采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法检测IGF-II基因和蛋白的表达...
日前，中国水产科学研究院长江水产研究所马杰、曾令兵等发明的“一种慢病毒转染鱼类或两栖类细胞系的方法”获国家发明专利授权，专利号为ZL201510459345.8。该发明公开了一种慢病毒转染鱼类或两栖类细胞系的方法。相关技术方案为：在慢病毒感染目的细胞中使用Lipofectamine 2000，目的细胞系被感染后，培养温度呈梯度变化，具体为30-32℃ 2h、26-8℃ 2h、20-25℃持续培养。...
pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究
pEGFP-hTERT hTERT基因 BRL-CM 鸡胚胎干细胞
2014/9/26
本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells，cESCs)，优化鸡胚胎干细胞培养体系，以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后，构建重组质粒pEGFP-hTERT，并利用FuGENE@HD转染鸡成纤维细胞(DF-1)，转染24 h后，荧光显微镜检测；再以80% BRL-CM（大鼠肝细胞条件培养基）与20% ...
旨在预测羊口疮病毒(ORFV)ORF125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位。设计引物PCR扩增ORF125基因，并将其定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体，经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pEGFP-ORF125。利用DNAStar和MEGA4.0元件分析不同毒株间ORF125基因的遗传进化关系，接着通过在线Expasy工具预测其二级结构并与Bcl-2家族成员进行比较。利用脂...
稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维细胞系的建立
双筛选标记 纤维素酶 2A 猪胎儿成纤维细胞
2013/11/29
旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体，筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系，为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞。采用SOE-PCR和PCR方法，分别扩增获得筛选标记基因NEO-T2A-EGFP序列和纤维素酶相关基因的融合序列SP-EGX-F2A-BGL1，构建腮腺特异性表达载体pPSP-SP-EGX-F2A-BGL1-CMV-NEO-T2A-EGFP，经PCR、...
为了为核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞，体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞，线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞，通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆，PCR 鉴定外源基因在细胞基因组中的整合，对阳性克隆进行传代2-3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录。...
为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染。克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体。用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24h后观察荧光...
旨在分析生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）转染效果的影响因素，探讨最佳转染条件，为进一步研究生长抑素基因疫苗的作用机制和作用效果奠定基础。以脂质体转染法将带有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞，探讨质粒转染HeLa细胞最佳条件的4个参数：质粒DNA剂量、脂质体剂量、最佳转染时间和质粒提取方法，在荧光显微镜下观察细胞转染情况并计...
本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l（IGF1）毛囊特异表达载体pCDsRKI，并转染绒山羊胎儿成纤维细胞，最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RTPCR方法获得IGF1 cDNA，其与KAP61基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF1毛囊特异表达载体pCDsRKI（大小7.4 kb）。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞，外源性表达载体...
分别用Lipofectamine^TM和Fegene-6介导质粒pEGFP-C1转染体外培养的绵羊胎儿成纤维细胞（sheepfetal fibroblast cells,sFFCs）,比较了DNA浓度、转染试剂用量以及细胞暴露于DNA、转染试剂中作用时间对转染效率的影响,通过含G418的DMEM/F12培养液筛选得到转基因单克隆细胞。结果表明脂质体转染试剂Lipofectamine^TM转染效率优...
转染技术在顶复门原虫研究中的应用
转染 顶复门原虫 基因功能 活载体疫苗
2009/10/12
自1993年转染技术首次在弓形虫中成功报道以来,顶复门原虫的转染研究得到了快速发展,不仅在弓形虫、疟原虫和住肉孢子虫等实现了稳定转染,而且在体外细胞上生长效率较低的柔嫩艾美耳球虫也相继实现了瞬时转染和稳定转染。顶复门原虫转染技术的日渐成熟及其在顶复门原虫研究中的应用,为顶复门原虫基因功能和免疫学等领域研究提供了新思路和新的有力工具。本文结合本课题组近几年来的研究成果,综述了转染技术及其在顶复门原虫...
阳离子脂质体基因载体的细胞转染研究
阳离子脂质体 转染效率 MTT
2009/7/15
研究阳离子脂质体在不同细胞中的转染效率及毒性。首先采用DNA 延滞实验研究Lipofectamine2000 、DOTAP 转染试剂与DNA 的
结合能力。然后选用绿色荧光蛋白的质粒pGFP- N2 作为报告基因模型和转染试剂制成复合物后转染Hela 、7721 、HT29 细胞, 比较多种因素对转染的影响。最后使用MTT 比色法分析Lipofectamine2000 、DOTAP 转染试剂对细...