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探讨 shRNA 靶向沉默接触蛋白-1（CNTN1）基因表达对人乳腺癌细胞株 MDA-MB-468 裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 18 只 4 周龄雄性 BALB/c 裸鼠随机均分为 3 组，收集处于对数生长期的 MDA-MB-468 细胞（空白对照组）、转染无义 shRNA 片段的 MDA-MB-468 细胞（空载体组）及转染 shRNA 载体片段的 MDA-MB-468 细胞（沉默组）分...
探讨甲状腺转录因子（TTF-1）对肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）药物敏感性及细胞上皮间质化的影响。方法将培养后的肺腺癌HCC827细胞分为空载体组、阴性质粒转染（NC-shRNA）组和阳性质粒转染（TTF-1-shRNA）组，通过shRNA干扰技术抑制细胞中的TTF-1基因表达，用流式细胞仪测定转染前后细胞凋亡率和细胞周期变化。不同浓度的吉非替尼（10、20、40、...
新型NGR靶向载shRNA脂质微球抑制胶质瘤的生长
靶向脂质微球 胶质瘤 基因治疗 NGR
2020/7/6
制备一种新型的NGR靶向载shRNA脂质体，研究其对大鼠原位胶质瘤的抑制作用。方法 （1）先后制备脂质微球（lipo）、NGR靶向微球（lipo-NGR）和含质粒靶向微球（shBirc5-lipo-NGR），并对各种微球的性质进行表征；（2）免疫组织化学法研究shBirc5-lipo-NGR对大鼠原位胶质瘤模型的靶向性；（3）MRI T2实时监测原位胶质瘤生长情况及观察大鼠生存期。
研究Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响。方法：培养视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞，构建Survivin-shRNA载体。按照处理不同分为Survivin-shRNA组、GFP组和CON组。分别采用流式细胞术检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞凋亡和细胞周期的影响，应用MTT法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞活...
MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立
迁移诱导基因 逆转录病毒 载体构建
2020/8/3
构建迁移诱导基因（migration inducing gene 7,MIG7）的逆转录病毒表达载体并测序，初步建立其包装细胞株。方法:根据MIG7已知序列设计合成所需脱氧寡核苷酸序列，并与线性RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体连接。PCR扩增热转化后的连接产物，检测和挑取阳性克隆和阳性菌落，提取质粒后测序，与Gen-Bank中特异性MIG7-shRNA基因序列对...
研究Xklp2靶蛋白（TPX2）shRNA对乳腺癌细胞生长、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法：乳腺癌细胞MCF-7感染靶向TPX2基因shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒，设置为TPX2 shRNA组、shRNA-NC组，把不做慢病毒感染的细胞设为对照组（Control组）。Real time PCR和Western blot测定沉默效果，MTT测定细胞增殖活性，克隆形成实验测定细胞克隆形成能力，流式...
研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox，ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞，Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测细胞中激活型Caspase-...
目前关于组织蛋白酶（cathepsin）在猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）生活周期中发挥功能的研究较少。为了探究宿主细胞中cathepsin在PRRSV吸附、入侵、脱壳、生物合成、组装以及释放过程中的作用，选取源于MA-104的非洲绿猴胚胎肾上皮细胞Marc145细胞系（对PRRSV易感）；...
旨在进一步揭示MSTN在绵羊成肌细胞中的调控机制，制备可有效失活MSTN基因的工具，为通过RNA干扰技术提高绵羊产肉量提供方法和理论依据。本研究以绵羊成肌细胞为试验材料，构建特异靶向绵羊MSTN基因的shRNA干扰质粒载体，将干扰效果好的质粒进一步包装为重组腺病毒，转染细胞后采用qRT-PCR和Western blot检测MSTN基因以及生肌调节因子和干扰素反应基因的表达。结果表明，质粒ShR21...
SET8-shRNA抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移
赖氨酸甲基转移酶 血管平滑肌细胞 细胞增殖 细胞迁移
2018/9/20
探讨赖氨酸甲基转移酶SET8对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。 方法 体外分离培养大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组、空质粒组、SET8-shRNA组。应用RT-PCR、Western blot检测SET8和钙黏附蛋白E-cadherin mRNA和蛋白的表达,应用MTT法检测细胞增殖能力,应用Transwell实验检测细胞迁移能力。 结果 SET8-shRNA组与正常对照...
以矮牵牛（Petunia hybrida）自交系‘Mitchell Diploid’（MD）为材料，通过3′ RACE和5′ RACE获得了其八氢番茄红素脱氢酶基因（PhPDS）的cDNA序列，进而通过PCR扩增出编码区的基因组序列。分析结果显示，PhPDS的cDNA序列全长2 182 bp，编码区序列1 746 bp，编码582个氨基酸。推测的蛋白质序列具有类胡萝卜素脱氢酶的保守结构域特征。编码...
利用慢病毒表达技术将稳定持续抑制PRRSV复制的shRNA导入Marc-145细胞，建立稳定表达靶向抑制PRRSV复制的shRNA的Marc-145阳性细胞克隆，并从细胞模型水平阐明抑制PRRSV复制的关键靶基因的干扰效果。采用LR重组技术，将pENTR/U6/Nsp9-4、pENTR/U6/Nsp9-6及pENTR/U6/-CON分别与pDEST载体进行LR重组，获得表达骨架，重组后的表达载体在...
超声靶向破坏微泡技术介导shRNA抑制小鼠肝癌细胞株JNK1基因表达
超声检查 微泡 肝肿瘤 转染
2014/11/14
探讨应用超声靶向破坏微泡（UTMD）技术介导shRNA抑制小鼠肝癌细胞株JNK1基因表达的能力。方法 构建并筛选shRNA最佳表达载体。体外培养肝癌细胞Hca-F，共分为5组：A组为空白对照组；B组为shRNA质粒组；C组为脂质体组；D组为超声微泡+超声辐照组；E组为脂质体+超声微泡+超声辐照组。应用倒置荧光显微镜观察转染率；荧光定量PCR检测JNK1的mRNA水平；Western-Blot检测J...
核因子-κB作为重要转录因子，与多种恶性肿瘤的发生发展有着密切联系，直接或间接抑制NF-κBp65的表达可逆转肿瘤细胞生物学行为。构建人核因子-κBp65基因shRNA重组质粒，感染A549细胞并筛选出稳定细胞株，对其迁移、粘附能力进行鉴定。方法 设计并合成人核因子-κBp65的乱序对照序列（scramble）和干扰序列（shRNA）构建重组质粒，在5’端引入一个BamHI位点，3’端引入一个Xh...
已有的研究证明nm23-H1基因是一个重要的肿瘤转移抑制基因，但其抑制肿瘤转移的生化机理尚不完全清楚。Nm23-H1基因结构和功能异常与肿瘤的侵袭转移有密切关系。我们前期已构建了nm23-H1的短发夹RNA（short hairpin RNA, shRNA）载体以及可抵抗此shRNA降解的nm23-H1的cDNA的表达载体，在此基础上我们欲应用基因定点突变技术构建具有不同酶活性并能抵抗此shRNA...