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本发明公开了一种鸢尾科植物红葱VIGS沉默体系的构建方法及其应用。本发明以烟草脆裂病毒TRV作为VIGS体系的载体，以红葱八氢番茄红素脱氢酶基因作为目的基因，利用真空渗透处理方法成功创建了适合红葱的VIGS沉默体系；将该体系应用于开展红葱色素合成相关基因EbMYB5和EbMYB52基因功能研究，被侵染的沉默处理组样品叶片中EbMYB5、EbMYB52基因表达量显著降低，且与色素合成途径相关的关键基...
番茄斑萎病毒N基因的VIGS载体构建
番茄斑萎病毒 病毒诱导的基因沉默 实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒
2020/12/24
番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)严重危害多种经济作物和园艺植物,其N基因与病毒的侵染力密切相关,将N基因直接构建到VIGS载体上研究其致病功能目前鲜见报道。本研究将TSWV N基因构建到pTRV-PTV00载体上,注射本氏烟,通过qRT-PCR定量分析发现先接种TSWV后注射沉默载体的植株抗TSWV效率达57.60%,先注射沉默载体后...
以经过改造的烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus，TRV）载体PYL156为工具，采用叶片注射法侵染茄子（Solanum melongena L.）叶片，通过表型比较、TRV病毒分子检测和荧光定量PCR技术分析，探究环境温度、植株大小、目的基因插入片段大小对茄子TRV-VIGS沉默体系的影响。结果表明，昼夜温度为（25 ± 3）℃和（20 ± 2）℃时，接种茄子幼苗子叶的植株沉默...
基于牡丹类黄酮糖基转移酶基因建立VIGS技术体系
牡丹 花色 VIGS 类黄酮糖基转移酶基因（UFGT） 功能验证
2018/4/3
牡丹（Paeonia suffruticosa Andrews）花色的化学基础研究较为深入，但因其无遗传转化体系，导致花色相关基因的功能验证只能利用其他植物进行旁证。利用保守区段长分别为413和418 bp的牡丹花瓣类黄酮糖基转移酶基因PsUF3GT和PsUF5GT，通过VIGS表达载体，采用二因素三水平的试验体系对目的基因进行沉默。结果表明，PsUF3GT和PsUF5GT的表达量在花斑中（盛开期...
非洲菊花瓣瞬时表达和病毒诱导的基因沉默(VIGS)系统的建立
非洲菊 花瓣 瞬时基因表达系统 病毒诱导的基因沉默
2018/12/29
非洲菊(Gerbera hybrida)是重要的园艺观赏花卉, 也是研究复杂花序进化与发育的模式植物。花瓣的生长对园艺观赏花卉品质的形成具有重要贡献, 阐明花瓣生长的分子机理将有助于增加对植物器官形态建成的认识, 并为花卉品质的改良提供理论依据。为了在非洲菊中更好地开展基因功能研究, 建立有效的转化系统十分必要。本研究以非洲菊舌状花花瓣为材料, 通过农杆菌真空渗透法, 分别以β-葡萄糖苷酸酶基因G...
利用VIGS技术研究草莓FaMYB5的功能
草莓 VIGS FaMYB5 负调控类黄酮代谢
2018/3/22
以‘丰香’草莓（Fragaria × ananassa‘Toyonaka’）为材料，采用病毒诱导的基因沉默技术（Virus-induced Gene Silencing，VIGS）对果实中类黄酮化合物代谢相关转录因子基因FaMYB5进行沉默，并对沉默后果实类黄酮化合物代谢途径相关的结构基因和其他转录因子基因表达量进行半定量RT-PCR及RT-qPCR分析。并分别采用HPLC和香草醛—硫酸比色法对沉...
TRV介导的VIGS技术在果蔬基因功能研究中的应用
病毒诱导的基因沉默 烟草脆裂病毒 果蔬 基因功能
2018/12/29
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)是近年来开发的一种快速鉴定植物基因功能的反向遗传学技术。因该技术需要借助病毒载体来实现, 所以病毒载体的开发一直备受关注。在已开发的病毒载体中, 烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus, TRV)具有寄主范围广、沉默效率高、可在多个组织产生沉默, 并且病毒诱导的症状轻微等独特的优势。因此, T...
病毒诱导的基因沉默( virus-induced gene silencing，VIGS) 是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制，近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比，VIGS 技术因具有周期短、成本低、可迅速观察表型等优点而被广泛应用于基因的功能鉴定。文章对VIGS 技术的分子机理、病毒载体系统、稳定遗传VIGS 植株的获得策略及其在大豆中的应用...
刺萼龙葵PDS基因VIGS载体的构建
刺萼龙葵 八氢番茄红素脱氢酶 病毒诱导基因沉默 烟草脆裂病毒
2017/11/23
病毒诱导的基因沉默(VIGS)是通过插入目的基因片段的重组病毒来抑制植物内源基因表达的遗传技术, 主要用于基因的功能分析。茄科植物刺萼龙葵(Solanum rostratum)是一种外来恶性杂草, 研究证实, 在农杆菌GV3101介导下, 刺萼龙葵的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因能被部分沉默, 导致叶片和花朵出现白化表型。半定量RT-PCR检测显示, 被侵染叶片和花朵的mRNA显著降解。VIGS...
利用VIGS技术对抗SMV候选基因GmZ-15的功能分析
大豆花叶病毒 病毒诱导的基因沉默 抗病基因 功能验证
2015/11/18
大豆花叶病毒(SMV)是我国大豆田间主要病毒性病害，阐明大豆对SMV的抗性机制对抗性的利用具有重要意义。利用VIGS技术对抗性基因-RSC3Q-的候选基因GmZ15进行功能分析，结果表明：GmZ15在SMV的诱导后表达量发生明显变化，在接种后24 h表达量达到最高。沉默GmZ15后的表达量分别为缓冲液对照和pGG7R2空载体对照组的0-3和0-2倍，差异极显著，表明GmZ15被有效沉默。沉默后接种...
东北地理所主持的大豆花模式建成相关同源基因VIGS库的构建项目取得新进展
东北地理所 大豆花模式
2009/12/2
近日，中科院东北地理与农业生态研究所研究员刘宝辉主持的“百人计划”项目“大豆花模式建成相关同源基因VIGS库的构建”取得新进展。该项目采用RNAi技术在大豆中单重和多重沉默模式植物中已知参与植物花模式建成的相关同源基因构建VIGS库。在该库中筛选萼片缺失或突变沉默个体，创造花形发生改变的大豆的基础材料，进而解决大豆雄性不育杂交种制种极度困难的生产实际问题。目前本项目已在大豆基因组中克隆了40个...