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应用EGFP评价方法研究环境样品的去甲基化表观遗传毒性
环境样品 去甲基化 表观遗传毒性 EGFP
2013/11/29
研究地表水、地下水、土壤等环境样品综合表观遗传毒性。方法 通过EGFP方法对淮河流域局部癌症发病关注地区的2个地表水、3个地下水、2个土壤、2个底泥样品的重金属提取液进行去甲基化表观遗传毒性测试。EGFP去甲基化表观遗传毒性评价方法基本原理为,pEGFP-C3质粒通过人工甲基化处理获得荧光蛋白基因启动子区处于高甲基化状态的C3质粒,并将其转染进人类HepG-2肝癌细胞株,随后以该改造细胞株(EGF...
鉴定人脐带间充质干细胞（hUCMSC）, 通过体外修饰增加体外合成mRNA转染hUCMSC的稳定性。方法 流式细胞仪检测hUCMSC免疫表型, 油红O和碱性磷酸酶染色分别进行成脂、成骨分化鉴定。体外合成EGFP的mRNA经polyA尾、帽子结构及碱基等方面的修饰转染hUCMSC, 流式检测荧光强度。Trypan blue染色观察mRNA转染对细胞活性的影响。结果 hUCMSC高表达CD29、CD4...
构建抑癌基因WTX慢病毒载体，建立稳定转导WTX的结肠癌Lovo/WTX-EGFP细胞株，为研究WTX在结肠癌中的作用机制提供有效工具。方法：通过Gateway技术构建WTX慢病毒载体pLV.Ex3d.null-EF1A>WTX>IRES/EGFP并通过菌落PCR筛选鉴定，将其与辅助质粒pLV/helper-SL3，PLV/helper-SL4，PLV/helper-SL5共转染293FT细胞包装...
构建含有人Apelin受体(Apelin-R)基因的pDC316-apelinR-EGFP腺病毒穿梭载体，为糖尿病相关基因Apelin的体内研究提供新方法。方法 PCR方法分别扩增Apelin-R基因，测序正确后与载体pDC316-EGFP连接，构建重组腺病毒载体pDC316-apelinR-EGFP;脂质体法与腺病毒骨架载体共转染HEK293细胞进行重组腺病毒包装，稀释法测定腺病毒滴度。RT-P...
超声微泡造影剂介导EGFP对兔视网膜的转染效率
造影剂 增强型绿色荧光蛋白 视网膜 基因治疗
2014/5/26
探讨在不同能量超声和一定剂量微泡作用下,超声微泡造影剂介导下增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒对兔视网膜转染的效率、安全性以及可行性。 方法 将30只新西兰大白兔随机分为6组:质粒组(A组)、质粒＋微泡组(B组)、质粒＋超声照射组①(C组)、质粒＋超声照射组②(D组)、质粒＋微泡＋超声照射组①(E组)、质粒＋微泡＋超声照射组②(F组)。将1 ml pEGFP-C1质粒与1 ml SonoVue微泡...
ODDD调控EGFP基因的乏氧特异表达载体的构建及其意义
增强型绿色荧光蛋白 氧依赖降解结构域 基因治疗
2012/10/24
构建乏氧诱导因子的氧依赖降解结构域（ODDD）调控的乏氧特异性表达荧光报告载体，探索其乏氧调控目的基因表达的可行性。方法：基因重组技术构建含有序列ODDD403-601aa、ODDD549-575aa和其2串联体调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光报告载体。φA细胞中瞬时表达EGFP，应用RT-PCR技术、Western blotting技术和流式细胞术检测ODDD调控EGFP乏氧特异性表达。结...
EGFP标记的Lewis肺癌细胞构建
裸鼠恶性胸腔积液模型
恶性胸腔积液 增强型绿色荧光蛋白 裸鼠模型 积分光密度
2013/12/4
恶性胸腔积液是晚期肺癌预后差的因素之一。本研究拟用Lewis肺癌细胞构建裸鼠恶性胸腔积液模型，从而建立一个良好的动物实验研究平台。方法 经胸膜腔接种表达增强型绿色荧光蛋白的Lewis肺癌细胞，建立裸鼠恶性胸腔积液模型。定期解剖小鼠，经小动物活体荧光成像系统观察肿瘤的生长。剩余小鼠定期行胸部CT检查，计算各时间点的成胸水率，并观察建模后裸鼠的生存期和肿瘤转移情况。所有小鼠在解剖时发现有胸水，抽取并计...
【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP)，从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，结合T7 表达系统，通过对eGFP 表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒，pFastBac-CMV-T7 RNAP 重...
血管生成素1和报告基因EGFP双基因共表达腺病毒的构建
血管生成素 腺病毒 基因转染 增强型绿色荧光蛋白
2011/10/25
目的：构建并制备血管生成素1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体. 方法：采用基因克隆技术克隆目的基因ANG1，并将得到的基因亚克隆至含有报告基因EGFP的穿梭载体pAdTrackCMV;使用Padeasy1腺病毒系统将含有目的基因的穿梭载体与腺病毒骨架质粒在细菌BJ5183中同源重组，产生重组腺病毒载体;线性化重组的腺病毒转染入QBI293A细胞中对重组的腺病毒进行包装并扩增. 结果：...
大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT2-EGFP融合蛋白的表达与鉴定
谷氨酰胺转运蛋白 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 表达
2012/7/20
谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白， 对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2 (SNAT2)在细胞膜上的表达与定位， 利用亚克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)构建于SNAT2的C端， 通过菌液PCR、酶切和DNA测序鉴定重组真核表达质粒; 将测序正确的重组质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T cells)，用Western blot...
EGFP标记的人肺癌裸鼠原位移植模型的建立
肺肿瘤 增强型绿色荧光蛋白 外科原位移植 模型
2013/12/9
小鼠活体分子成像模型可以连续实时监测活体肿瘤的变化。本研究拟通过外科原位移植法建立表达绿色荧光蛋白的肺癌裸鼠原位移植模型并探讨其肿瘤生物学特性，从而建立一个良好的肺癌动物实验研究平台。方法 利用逆转录病毒转染法将增强型绿色荧光蛋白基因导入人肺癌大细胞系NCI-H460，采用外科原位移植法建立肺癌原位移植模型。定期通过小动物活体荧光成像系统观察肿瘤生长，利用相关性检验分析荧光面积和肿瘤体积之间的相关...
含AFP基因调控序列的pAFP-P53-EGFP质粒诱导AFP阳性肝癌细胞凋亡
P53 细胞周期阻滞 细胞凋亡
2012/5/18
观察含AFP基因调控序列的载体对AFP阳性肝癌细胞的靶向致凋亡作用。方法：将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2 kb的AFP基因调控序列，构建pAFPEGFP载体，分别转染人肝癌HepG2（AFP阳性）、人肝癌SMMC7721（AFP阴性）和人宫颈癌HeLa（AFP阴性）细胞，荧光显微镜下观察EGFP荧光蛋白表达强度。引入P〖STBX〗53〖STBZ〗基因片段，构建p...
观察含AFP基因调控序列的载体对AFP阳性肝癌细胞的靶向致凋亡作用。方法：将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2 kb的AFP基因调控序列，构建pAFP EGFP载体，分别转染人肝癌HepG2（AFP阳性）、人肝癌SMMC7721（AFP阴性）和人宫颈癌HeLa（AFP阴性）细胞，荧光显微镜下观察EGFP荧光蛋白表达强度。引入P〖STBX〗53〖STBZ〗基因片段，构建p...
比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白（eGFP）转染人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs）和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs, rBMSCs)的效率。方法：分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs，成骨、成脂诱导培养以鉴定BMSCs。构建含eGFP的AdF35重组腺病毒载体AdF35-eGFP，以不同感染复数...