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为解决如何进一步提高栽培稻种中杂草稻检测的精度和效率的技术问题，本发明提供一种用于检测大批量栽培稻种中杂草稻混杂的PCR组合引物，所述PCR引物组包括第一次PCR引物和第二次PCR引物，所述第一次PCR引物为XRED68，所述第二次PCR引物为XRED69。本发明还提供PCR引物组在检测栽培稻种中混杂杂草稻中的应用。通过本发明提供的引物组和应用，实现了从现有的对栽培稻中混杂杂草稻的10:1精度检测...
上海市农业科学院作物育种栽培研究所水稻中心在农业和生物科学领域主流期刊Ricescience(二区，IF=3.162)刊发了题为“A New PCR/LDR-Based Multiplex Functional MolecularMarker for Marker-Assisted Breeding in Rice”的研究论文。
茉莉花实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证
茉莉花 qRT-PCR 内参基因 表达稳定性
2021/4/1
为筛选适合茉莉花的内参基因，以5种组织（根、茎、嫩叶、成熟叶、花）和4个发育阶段的花（幼蕾期、膨大花蕾期、最长花蕾期和初绽期）为试验材料，选择较常见的8个候选内参基因进行引物特异性分析，结果显示，8个内参基因均扩增出单一条带，溶解曲线均只有明显的单一峰。采用qRT-PCR技术分析8个内参基因在不同样品中的表达量，结果显示，内参基因在不同样品中的表达量存在差异，各基因在花中的表达量均显著低于其他样品...
多重PCR检测耐除草剂转基因作物
转基因作物 除草剂抗性基因 多重PCR 筛选检测
2020/3/19
为建立耐除草剂转基因作物的高通量检测方法,本试验以目前生产上广泛应用的5种除草剂抗性基因dmo、pat、CP4EPSPS、bar和aad1为靶标进行多重PCR(MPCR)研究。通过引物适用性测试、反应体系中的不同引物浓度和反应程序中的退火温度测试、灵敏度和特异性验证等,建立了能同时检测5种除草剂抗性基因的MPCR检测方法。结果表明,当dmo、pat、CP4EPSPS、bar、aad1基因的检测引物...
DNA条形码与实时荧光定量PCR技术在铁皮石斛鉴定中的应用
铁皮石斛 多重荧光PCR 探针 鉴定
2020/6/17
为建立铁皮石斛准确、高效的鉴定体系,本研究以101份石斛属和蝴蝶兰属植物样品为试验材料,通过对比ITS、psbA-trnH、matK及rbcL基因在石斛属植物中的鉴定能力,筛选出ITS作为本研究最理想的DNA条形码。以ITS序列作为靶基因,设计铁皮石斛特异引物和特异探针,以及石斛属通用引物和探针,利用实时荧光定量PCR(TaqMan)技术,建立铁皮石斛多重实时荧光PCR检测新体系,通过特异性、灵敏...
冬瓜实时荧光定量PCR内参基因的筛选与评价
冬瓜 内参基因 非生物胁迫
2020/3/19
为筛选适合冬瓜稳定表达的内参基因,以黑皮冬瓜低温、高温、干旱胁迫处理不同时间的叶片和正常处理不同组织为试验材料,利用RT-qPCR技术,结合GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评价7个候选内参基因(28SrRNA、UBQ、RP Ⅱ、GAPDH、EF-1α、UBC21和TUA)稳定性。结果表明,7个候选内参基因在不同组织和不同胁迫处理下表达丰度及稳定性存在差异; EF-1α在...
西南鸢尾花色变异实时定量PCR内参基因的筛选与验证
西南鸢尾 花色变异 实时定量PCR 内参基因
2020/3/9
为筛选适用于不同花色西南鸢尾花色合成途径相关基因表达分析的内参基因,本研究根据西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾花蕾组织的转录组测序数据,筛选了6个常用内参基因(ɑ-TUB、β-TUB、AQP、ACT、GAPDH、UBQ),同时以百合18S做为对照内参基因,在西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾的花蕾组织中,分别通过反转录PCR(RT-PCR)初筛和RT-qPCR检测表达量,并利用geNorm、Norm...
利用转移PCR技术构建玉米SnRK2基因家族表达载体
表达载体 玉米 蔗糖非酵解型蛋白激酶 转移PCR(T-PCR)
2020/3/10
在构建玉米蔗糖非酵解型蛋白激酶2(SnRK2)基因家族表达载体的过程中,因为表达载体可供选择的多克隆位点较少,且有些还与目的基因同源,所以采用转移PCR(T-PCR)扩增技术替代通常的酶切连接方法。为避免错误连接或未连接的第一轮T-PCR中间产物对退火温度不同的第二轮扩增循环产生干扰,本研究对T-PCR接头引物3'-端和5'-端的两段序列及其退火温度、引物、供体质粒和目标质粒模板的浓度,特别是温度...
构建中国榛属植物主要栽培种平欧杂种榛实时荧光定量PCR内参基因的筛选体系，并筛选稳定的内参基因，为榛属植物的基因表达分析提供内参基因，进而为其植物资源利用和创新育种研究提供理论基础。【方法】利用课题组前期对平欧杂种榛不同亲和性授粉、授粉后不同时间的雌蕊转录组测序数据，结合相关文献搜索，共选取12个候选内参基因；以平欧杂种榛主栽品种‘达维’的盛花期雌蕊、未伸长期雄花序、幼嫩叶片、花粉、一年生枝形成层...
为了建立最优甜菜的来源保守DNA序列多态(conserved DNA-derived polymorphism，CDDP)分子标记扩增体系，以期利用CDDP分子标记技术进行甜菜品种指纹图谱的构建、核心种质构建及分子标记辅助育种。本实验利用单因素变量的方法对甜菜CDDP体系进行优化；最终确定了甜菜最适CDDP体系，体系总体积为20 μL，其中包括10 μL MIX，0.5 μL引物，0.5 μL D...
利用多重PCR技术快速检测五个转基因大豆品系
转基因大豆 多重PCR 品系特异性检测
2016/12/15
转基因大豆305423、MON89788、CV127、GTS40-3-2、356043作为商品化应用最为广泛的大豆品系，种植面积占世界转基因大豆总种植面积的80%以上。根据大豆内标准基因Lectin和5种转基因大豆品系的边界序列设计特异性引物。通过验证引物的适用性、特异性和灵敏度，优化多重PCR检测体系中不同引物的用量及反应退火温度，建立了能同时扩增大豆内源基因Lectin和5个转基因大豆品系的六...
油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R是从抗性突变体M9中克隆获得，抗性基因BnALS1R与野生型基因BnALS1存在1处SNP，即乙酰乳酸合酶第638位丝氨酸残基被天冬酰胺酸替代。为获得油菜抗除草剂基因BnALS1R的分子标记，根据该处点突变，结合获得的BnALS3与BnALS1序列，开发30条等位基因特异PCR (allele-specific PCR，AS-PCR)引物，采用筛选出的3条A...
为研究不同转基因作物T-DNA插入位点侧翼序列分离中所用的通用简并引物对TAIL-PCR的影响,本研究使用5个通用简并引物分别对8个转基因大豆、30个转基因水稻和2个转基因油菜株系进行了TAIL-PCR分析,结果表明,5个简并引物在TAIL-PCR中的扩增效果存在显著差异,同一简并引物在不同转基因物种的扩增效果显著不同。AD1引物在转基因水稻和转基因油菜中扩增效果较好,AD2引物在转基因水稻、油菜...
易错PCR研究进展及应用
易错PCR 随机诱变 研究进展
2013/9/4
易错PCR是目前最简单、有效的一种基因体外随机诱变技术,是农业、工业、生物制药等领域获得优异基因的重要手段。本文综述了易错PCR的基本原理、方法、发展历程,以及该技术的最新研究成果、成功应用领域,并提出了目前存在的问题和可能解决途径。